肉的宰后嫩化常见归因于肌原钎维形式的严重破坏，肌原钎维形式是由内源性蛋清淀粉酶酶质质电离酶可光降解肌原钎维和上皮生殖上皮受损细胞膜骨架蛋清导致的的。与十几年来很久是重视着重的钙蛋清酶各个，胱天蛋清酶（caspases）近日是感爱好来看题。胱天蛋清酶在上皮生殖上皮受损细胞膜凋亡的程序执行第一阶段起着至关关键的功用，表中caspase-3在人死后蛋清淀粉酶酶质质电离中的功用是各个面和麻烦的，但是必玩进1步深入分析。S-亚硝基化进行自动调结钙解放、动能产生、蛋清质可光降解和上皮生殖上皮受损细胞膜凋亡来自动调结肉质地，包扩嫩度和持水效果。的早期深入分析显示S-亚硝基化可下跌依赖于线粒体的caspase-3级联生理反应，这可以是胸肌上皮生殖上皮受损细胞膜凋亡和羊肉品行变化无常的诱因。caspase-3的深入分析关键是其与上皮生殖上皮受损细胞膜凋亡的关心，那么，非常少有深入分析研讨S-亚硝基化自动调结caspase-3的规则。

2024年9月由成都林果大家张万刚教援销售团队在期刊Journal of Agricultural and Food Chemistry发表题为“Exploring the Effects of S‑Nitrosylation on Caspase‑3 Modification and Myofibril Degradation of Beef In Vitro”文章，研究发现了GSNO处理后caspase-3的活性显著降低（P < 0.05），并表现出剂量依赖性的抑制作用，其在半胱氨酸116、170、184、220和264位点被S-亚硝基化，进一步抑制了其对牛肉肌原纤维蛋白的蛋白水解能力。拜谱海洋生物为该研究提供了亚硝基化修饰语组学拜谱生物，助力发现目的蛋白上的亚硝基化修饰位点。

中文名大标题：体外研究S-亚硝基化对牛肉Caspase-3修饰和肌原纤维降解的影响

论文期刊：Journal of Agricultural and Food Chemistry

202多年印象指数公式：5.7

提出用时：2024年9月

合作方方：南京农业大学

科学研究用料：蛋白

拜谱展示 能力：亚硝基化修饰组学

的技术路径：

一、科学研究导致

01.Caspase-3活性氧

现尚不明确NO对caspase-3的治理和改善功效是归因于NO介导的S-亚硝基化，有差异渗透压系数的GSNO当做外源性NO制造，以引发caspase-3的体内S-亚硝基化。结论反映，与不GSNO的组较之，100、200和400μM GSNO组的caspase-3几丁质酶显著性消减了（图1），与事先有关报道保持一致。GSNO治理消减了caspase-3几丁质酶的隐性理由仍急待指出。

图1 不一样的浓度值的GSNO加工处理对caspase-3催化活性的影向

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

02.Caspase-3的S-亚硝基化程度较

探究Caspase-3的亚硝基化度，以具体分析GSNO对Caspase-3的生理反应性。经GSNO处理后，的在线检测到caspase-3蛋白酶S-亚硝基化硬度曾加（图2）。这么多结杲意味着，外源性GSNO陪养可取得胜利促进caspase-3的身体外S-亚硝基化。可笑惊喜的是，在也没有GSNO会存在的剖析组中的在线检测到一款变弱的S-亚硝基化带，这意味着caspase-3可能会发生了内源性的S-亚硝基化。凡此种种，本探究中caspase-3的S-亚硝基化度较高，而caspase-3的活性酶减低，这与事先的探究不同。那么，caspase-3的特女性朋友S-亚硝基化淡化位点尚不知道，还需要进步的摸索。

图2 GSNO外理对caspase-3S-亚硝基化水平面的关系

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

03.Caspase-3的S-亚硝基化位点

通过亚硝基化突显组学检测caspase-3的S-亚硝基化位点。结果表明，caspase-3上的4个多肽中有5个半胱氨酸残基被蛋白S-亚硝基化修饰（图3）。亚硝基化半胱氨酸定位于SSFVCVLLSHGEEGIIFGTNGPVDLK,GTELDCGIETDSGVDDDMACHKIPVEADFLYAYSTAPGYYSWR,DGSWFIQSLCAMLK和KQIPCIVSMLTK的多肽中，分别位于116、170、184、220和264位。S-亚硝基化caspase-3多肽的MS1和MS2光谱显示Caspase-3是一种具有8个半胱氨酸残基的半胱氨酸蛋白酶，其中5个半胱氨酸被发现被亚硝基化，说明Caspase-3易受亚硝基化修饰（图4）。此外，据先前报道casase-3的催化残留亚硝基化Cys163，这不同于本研究的结果。S-亚硝基化caspase-3的丰度、位点的修饰水平和检测方法的灵敏度的差异可能是导致结果不一致的原因之一。可以推断，半胱氨酸蛋白酶活性的调节可能是由NO和蛋白S-亚硝基化介导的，这可能影响蛋白降解，促进死后衰老。

图 3 caspase-3的编码队列。粉色标注的编码队列说S-亚硝基化肽，颜色标注的C说S-亚硝基化半胱氨酸

(图源：Hou, Qin et al., JAgric Food Chem.. 2024)

图4. s-亚硝基化肽和caspase-3位点的MS1和MS2光谱仪

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

04.S-亚硝基化Caspase-3光降解结血清

结球蛋清质看做是一种必要的上皮组织骨架球蛋清质，在保持肌上皮组织设计的设计完全性和收拢性这方面起着必要做用，调查S-亚硝基化caspase-3对结球蛋清质溶解的皮肤敏感度高的享有必要功用。与Std（未用胱天球蛋清质酶-3和GSNO孵育的刚开始肌植物纤维板球蛋清质）组差距，0 μM GSNO组（肌原植物纤维板和caspase-3的孵育，无GSNO）的完全结球蛋清质分子量有凸显减少，信息提示caspase-3对结球蛋清质享有风险的球蛋清质水解反应作用。在GSNO孵育后，完全结球蛋清质的分子量凸显增添（P < 0.05）。另外，当GSNO有机废气浓度提高时，完全结球蛋清质的分子量一直上浮（P < 0.05）（图5）。上述阐明阐明，SNO突显的caspase-3以能力依赖症的具体方法克制结球蛋清质的溶解。

图5.S-亚硝基化caspase-3溶解结核蛋白

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

05.S-亚硝基化Caspase- 3吸附肌钙球蛋白-T

肌钙核核核淀粉酶酶-T (TnT)是原肌球核核核淀粉酶酶上下调整责任脂肪内缩的细条的所需肌原钎维核核核淀粉酶酶。TnT的化学挥发优点是检查测量到28和30 kDa的TnT。在亚硝基化生活条件下，caspase-3对TnT的化学挥发问题图甲6如图所示，与Std组（包含caspase-3和GSNO的肌原钎维）相信，caspase-3组中30 kDa TnT片断相关性曾加，表达caspase-3操作了TnT的化学挥发，虽然，caspase-3与GSNO的孵育直接引响30 kDa TnT应该减少。在100和200 μM GSNO组彼此还没有检查测量到特别的差距(P > 0.05)，而当GSNO的密度达标400 μM 时，该片断相关性应该减少(P < 0.05)。这样的遇到表达了SNO淡化的caspase-3对TnT化学挥发的抑创用处用处。结核核核淀粉酶酶和TnT是caspase-3的灵敏底物，而GSNO工作削减caspase-3的抗逆性很有可能直接引响肌原钎维核核核淀粉酶酶化学挥发数量削减。总而言之阐明，NO成脂的S-亚硝基化应该依据淡化半胱氨酸残基来上下调整caspase-3的抗逆性，以致进几步直接引响其对结核核核淀粉酶酶和TnT的核核核淀粉酶酶溶解效率，为了直接引响牛肉片品控。

图6. S-亚硝基化caspase- 3化学降解肌钙球蛋白-T

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

二、个人总结

本探析有何意义研讨S-亚硝基化对caspase-3表达语的会印象以至于其次对牛肉片片肌原纤维板棉身体生物降解的会印象。球血清S-亚硝基化应该表达语caspase-3的半胱氨酸残基，因而引发caspase-3特异性降低，进的一步抑止了其对牛肉片片肌原纤维板棉球血清的球血清油脂水解的能力。

三、拜谱个人总结

研发应用了酶活检验，亚硝基化体现组学了解，WB等测试法律手段，发掘蛋清酶酶S-亚硝基化能体现caspase-3的半胱氨酸残基，这以至于了caspase-3特异性的降低，相结那步可以抑制了其对牛肉片肌原氯纶蛋清酶酶的蛋清酶酶水解反应能力素质。本研发为定义蛋清酶酶质亚硝基化对口感的调节管控系统可以提供好几个个新的视域。

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参看论文资料：

Qin Hou, Chao Ma, Rui Liu, Zhuangli Kang, and Wangang Zhang.Exploring the Effects of S-Nitrosylation on Caspase-3 Modification and Myofibril Degradation of Beef In Vitro. Journal of Agricultural and Food Chemistry. doi.org/10.1021/acs.jafc.4c06663